配置好的反應體系于冰上保存?zhèn)溆茫苊夥磸蛢鋈凇?/div>
二、實驗操作規(guī)程
1.上機設置
選擇ASFV專用檢測程序：
（1）預變性：95℃ 30s
（2）循環(huán)擴增（40 cycles）：
①變性：95℃ 5s
②退火/延伸：60℃ 30s
③熒光采集：FAM通道（探針檢測）
2.樣本裝載
將配置好的反應管裝入加熱模塊，確認：
（1）管蓋密封完好
（2）試管無氣泡殘留
（3）樣本編號與軟件對應
設置陰性對照（N/C）、陽性對照（P/C）和標準品，建議每板設置3個N/C。
3.儀器運行：啟動PCR程序，實時監(jiān)控擴增曲線。正常狀態(tài)下，陰性對照應無S型擴增，陽性對照CT值應在18-25之間。
三、結果分析與報告
1.數(shù)據(jù)分析
CT值判定標準：
（1）CT≤30且呈現(xiàn)典型S型曲線為陽性
（2）CT＞35或無擴增曲線為陰性
（3）30＜CT≤35需重復驗證
FAM通道Ct值≤閾值（可參照試劑盒要求）判定為ASFV核酸陽性。
2.報告生成
報告內容應包含：
（1）樣本編號及來源；
（2）CT值及擴增曲線圖；
（3）陽性/陰性判定結果；
（4）檢測及復核人員簽名；
（5）檢測日期及實驗室信息；
3.廢棄處理：實驗結束后，生物危害廢棄物需按規(guī)程處理，反應管置于專用廢料桶中。
四、非洲豬瘟熒光定量pcr儀注意事項
1.操作全程必須穿戴防護服和手套；
2.每批次實驗需同時設立陰、陽性對照；
3.儀器表面每日使用75%乙醇消毒；
4.建議每月使用標準物質進行儀器校準；
5.當檢測結果異常時，必須進行復檢確認。
本操作流程嚴格遵循GB/T 40947-2021《非洲豬瘟診斷技術》國家標準，規(guī)范化的操作可有效預防交叉污染，確保檢測結果的準確性和重復性。實驗室需建立完整的質量控制體系，定期對操作人員進行專業(yè)培訓，為非洲豬瘟防控工作提供科學依據(jù)。
